Kirsten Walther var datter af officer Christian Thomas Walther (1892 – 1956) og Esta Frederikke Thomsen (1903 – 1975). Hun debuterede efter sin studentereksamen i Studenterrevyen 1953 sammen med Klaus Rifbjerg og Jytte Abildstrøm. Hun blev uddannet på Privatteatrenes elevskole 1953-1956 og virkede siden som skuespiller på Det Ny Teater, ABC Teatret, Aveny Teatret, Folketeatret, Gladsaxe Teater, Allé-Scenen, Ungdommens Teater, Nørrebros Teater og i Cirkusrevyen, hvor hun i 1968 sang visen “Lav et bankkup” og i 1984 havde en monolog om danskernes drukvaner. Hun dublerede i 1958 Bodil Kjer i “Toreadorvalsen” på Det Ny Teater. I 1963 fik hun gennembrud som kvindelig komiker på ABC Teatret som sekretæren i farcen “Indiskret”. Hun havde endvidere en stor succes med rollen som Blanny i forestillingen “Den grønne Elevator” i samspil med Jørgen Ryg. Senere medvirkede hun bl.a. i “Ærkeengle laver aldrig fiduser” på Gladsaxe Teater og hun havde karakterroller i TV i “Gidslet”, på Allé-Scenen i “Molloy” i 1979 og på Nørrebros Teater som moderen i “En duft af honning”. Hun medvirkede desuden i radio og på TV bl.a. i de satiriske udsendelser Hov-Hov, der startede i 1968 og i tv-serien “Smuglerne”. Kirsten Walther skabte med sin specielle jordnære blanding af umiddelbar sødme og anarkistiske humor nogle særprægede figurer i den danske folkekomedie. Først og fremmest som Karla i tv-serien “Huset på Christianshavn” (1970 – 1977), som Gyldenkåls hustru i Familien Gyldenkål-filmene (1975-1977)og som den indskrænkede Yvonne i de 13 film om Olsenbanden (1968 – 1981). Den sidste af disse film, Olsen-banden over alle bjerge (1981), blev også Kirsten Walters sidste film. Hendes første film var “Kispus” fra 1956, hvor hun spillede en meget lille rolle som en ekspeditrice, der bærer en kjole frem til modellen Bodil Miller. Kirsten Walther blev den 26. september 1959 gift med TV-producer og instruktør Palle Ruben Wolfsberg, der oprindelig var skuespiller og som hun havde mødt på elevskolen. Sceneskræk og nervepres satte op gennem 1980erne sit præg på hendes karriere.